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文章名稱：PKMYT1 kinase ameliorates cisplatin sensitivity in osteosarcoma
中文名稱：PKMYT1激酶改善骨肉瘤對順鉑的敏感性
雜志名：Signal Transduction and Targeted Thera
期刊影響因子：40.6
第一作者：Binfeng Liu
通訊作者：Zhihong Li
發(fā)表日期：2025.5.21
DOI：10.1038/s41392-025-02250-7
概述
本研究通過 CRISPR 篩選發(fā)現(xiàn) PKMYT1 是順鉑抗性的重要調(diào)節(jié)因子。它通過抑制DNA損傷修復(fù)路徑（影響NPM1 和下游 BRCA1 等因子的功能）來幫助OS細(xì)胞逃避化療。沉默 PKMYT1 或使用其抑制劑 RP6306 可以增強(qiáng)順鉑的殺傷效果，為克服骨肉瘤化療耐藥性問題提供了新方向和聯(lián)合治療思路。
研究背景
順鉑（Cisplatin, DDP）是治療骨肉瘤（OS）的主要化療藥物，但普遍存在耐藥性這個(gè)問題導(dǎo)致其臨床療效受限。因此，更為重要的是開發(fā)增強(qiáng)OS細(xì)胞對DDP敏感性的方案。本研究旨在識別調(diào)控DDP敏感性的關(guān)鍵因子，并探討其作為潛在治療靶點(diǎn)的可能性。
實(shí)驗(yàn)方法
研究團(tuán)隊(duì)采用了基因組范圍的 CRISPR 篩選方法，結(jié)合轉(zhuǎn)錄組測序，識別出調(diào)控 DDP 敏感性的關(guān)鍵因子。隨后，通過分析患者來源的臨床樣本，并進(jìn)行體外功能實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證這些因子的作用。此外，研究還使用了選擇性PKMYT1 抑制劑 RP6306，評估其與 DDP 聯(lián)用的協(xié)同效應(yīng)。
CRISPR 激酶庫篩選方案的示意圖
靶向 PKMYT1 通過調(diào)節(jié) NPM1 的磷酸化來改善順鉑對OS的敏感性的模型示意圖
研究結(jié)果
篩選結(jié)果揭示，PKMYT1 是調(diào)控OS細(xì)胞對DDP敏感性的關(guān)鍵因子。
DDP 處理可誘導(dǎo)OS細(xì)胞中 PKMYT1 的激活。
PKMYT1 的沉默顯著增強(qiáng)了細(xì)胞對 DDP 的敏感性，提示其在促進(jìn)化療耐藥性中的作用。
在機(jī)制上，PKMYT1通過磷酸化核磷蛋白1（NPM1）S260 位點(diǎn)，競爭性地抑制 NPM1 的 SUMO 化。這種修飾干擾了DNA損傷反應(yīng)因子（如BRCA1、RAP80和RAD51）的募集，最終影響雙鏈斷裂（DSB）的修復(fù)。
選擇性 PKMYT1 抑制劑 RP6306 與 DDP 聯(lián)用，可增強(qiáng)其在OS細(xì)胞中的細(xì)胞毒性作用。
實(shí)驗(yàn)中用到的NEST產(chǎn)品：胎牛血清，涉及的細(xì)胞：143B、U2OS、HOS、U2OS/DDP、293T
本研究中共使用了多種人骨肉瘤（OS）細(xì)胞系及對照細(xì)胞系，包括：
正常成骨細(xì)胞：hFOB1.19
OS細(xì)胞系：Saos-2、MG63、U2OS、HOS、143B
順鉑耐藥細(xì)胞株：U2OS/DDP
其他細(xì)胞系：HEK293T、ZOS/M
細(xì)胞培養(yǎng)條件如下：不同細(xì)胞系根據(jù)推薦標(biāo)準(zhǔn)，使用不同的培養(yǎng)基（DMEM、MEM、McCoy's 5A等）。培養(yǎng)基統(tǒng)一添加 10% NEST胎牛血清（FBS），另外還補(bǔ)充了1%青鏈霉素雙抗，維持無菌狀態(tài)。
本研究使用的 10% NEST胎牛血清（FBS） 是細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中的核心成分之一，為細(xì)胞提供穩(wěn)定的生長因子、激素及粘附蛋白。
NEST胎牛血清
以下是研究實(shí)驗(yàn)過程中，細(xì)胞培養(yǎng)后相關(guān)的實(shí)驗(yàn)實(shí)圖
骨肉瘤（OS）組織樣本進(jìn)行了PKMYT1的免疫組化染色（化療前后）
來自指定異種移植瘤的代表性免疫組化圖像。
用特定藥物或組合處理類器官24小時(shí)，使用細(xì)胞活力檢測試劑盒評估存活率。
